- Сводите к минимуму скачки давления в хроматографической системе. Для этого осуществляйте ввод пробы резким поворотом ручки инжектора для снижения гидравлического удара. Обеспечьте наименьшую пульсацию насосов, вызванную, как правило непостоянной объемной скоростью подвижной фазы (фаза не дегазована). Избегайте гидравлических ударов.
- Используйте предколонку и/или "in-line" фильтр с диаметром пор 0,5 мкм. Подсоедините их в линию между инжектором и аналитической колонкой. Фильтр задержит крупные механические частицы, а предколонка предотвратит попадание сильноудерживаемых примесей на аналитическую колонку.
- Как можно чаще промывайте колонку сильным растворителем. Обычно бывает достаточно промыть колонку 100% ацетонитрилом. Тем не менее, если необходим более сильный (менее полярный) растворитель, то можно применить метиленхлорид, являющийся одним из наиболее сильных растворителей в обращеннофазной хроматографии. При перемывке помните о совместимости растворителей и возможности образовании осадков. Многие сильные органические растворители не смешиваются с водными подвижными фазами и буферами, поэтому перед и после использования метиленхлорида необходимо перемыть колонку изопропанолом.
- Перед вводом "грязной" пробы в колонку необходимо провести пробоподготовку для удаления механических частиц и сильноудерживающихся на колонке примесей. В качестве пробоподготовки используйте такие приемы, как твердофазная экстракция, фильтрация через пористый 0,45 мкм фильтр и центрифугирование.
- Колонки на силикагелевой основе используйте с подвижными фазами, pH которых лежит в диапазоне от 3-х до 7. Для работы за пределами данного диапазона используйте специально предназначенные для этого силикагелевые колонки или колонки на полимерной основе.
- При работе с буферными растворами используйте только свежеприготовленные буферы. Если это невозможно, добавляйте в емкость 100 - 200 мл/л азида натрия для предотвращения роста бактерий. Помните, что азид натрия очень ядовит, и по токсичности сопоставим с цианидами.
- Перед хранением или транспортировкой колонки отмойте ее от солей и буферных растворов и оставьте в чистом ацетонитриле. Это предотвратит выпадение осадков и рост бактерий в колонке. Кроме того, ацетонитрил является хорошим растворителем для хранения, в отличие от водных и спиртовых смесей, способных ускорять гидролиз неподвижной фазы.
|
